差速離心法

    差速離心法指分步改變離心轉(zhuǎn)速或向速崎低速離心交替進(jìn)行，選用大小不向的離心力使具備不同質(zhì)量、不同沉降系數(shù)的微小顆粒(粒子或大分子)從混合的懸浮液中分批沉降而進(jìn)行分離的力法。該方法適用于在懸浮液中的樣品顆粒之間重量存在較大差別，更準(zhǔn)確地說是沉降系數(shù)的差別在一個(gè)到幾個(gè)數(shù)量級(jí)的混合樣品的分離。重量或S值的差別越大，分離的效果越好。對于差別較小的顆粒，差速離心法就很難得到滿意的分離效果。這種離心方法是通過得到沉淀或得到除去大的顆粒后的上清液來進(jìn)行分離、提取。該方法又稱差速沉淀法。
    差速沉淀離心一般采用角轉(zhuǎn)子。在離心開始時(shí)，所有顆粒都均勻地分布在整個(gè)離心管中，離心期間各種顆粒以不問速度向管底沉降，纖過一定時(shí)間，重的或S值大的顧粒全部沉別管底，得到不合這種顆粒的上清液。將上清液進(jìn)一步以更高轉(zhuǎn)速離心一定時(shí)間，又對得到次輕的顆粒，逐漸增加離心轉(zhuǎn)速就可以分步得到不同質(zhì)量、不同S值的顆粒樣品，達(dá)到分離的目的。
    但是每次得到的沉淀并不均一，這是由于各種大小和密度的顆粒的離心管中均勻分布，經(jīng)一定時(shí)間離心后全部重的顆粘達(dá)到管底時(shí)，離心開始時(shí)離管底較近處的較輕顆粒也沉到管底而混于該重顆粒之中，所以還要將沉淀再懸浮，以原來的轉(zhuǎn)速再次離心，獲得的沉淀將更加“純”一些，這樣反復(fù)幾次就可以得到基本上大小均一的“純”樣品。這個(gè)過程稱為“洗”沉淀。將每次洗過的上清液合并起來以更向轉(zhuǎn)速離心，從上清液或沉淀得到分離提純的另一組分。
    差速離心常用來分離各種化細(xì)胞器從粗提、蛋白質(zhì)。例如組織勾漿可根據(jù)它們的S值大小與具他組分提山來。這種方法將初的沉淀反復(fù)地懸浮和離心2—3次就能得到一個(gè)相對純的亞細(xì)腦組分，但得到的糾分也不是均一，可以進(jìn)一步用一種連續(xù)的液體密度梯度代替均勻的懸浮介質(zhì)，從而得到一個(gè)更好的分離。

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