蜀科離心機在抗衰老領域的重要應用（二）

  人類的動脈硬化、炎癥、糖尿病、癌癥等多種疾病和衰老等被證實與活性氧和自由基有關.接下去以葡萄為原料，研究天然發酵過程中還原力、DPPH自由基、羥基自由基、超氧自由基和ABTS自由基清除能力的變化，其中蜀科立式高速離心機又發揮了強大的作用。

  行葡萄酵素的制備。用無菌水在無菌條件下 輕輕沖洗除去葡萄表面沙子和灰塵，在無菌操作臺中自然晾干。紅糖用紫外殺菌45min。葡萄與紅糖按質量比1∶1加入到已滅菌的玻璃瓶中，封口，放在暗處，常溫下發酵56d。為了避免潛在的菌體污染，制備過程中所有操作都在無菌條件下進行。在發酵過程中，每隔8d取樣，樣品經蜀科高速離心機 10000r/min離心10min后，用于測定。
總酚含量測定
  100μL樣品加入到45.9mL去離子水，再加入1mLFolin-Ciocalteau試劑，反應3min，后加入3mL20%的碳酸鈉溶液，25°C恒溫水浴振蕩2h，在760nm波長處測 定吸光度，以去離子水為參比溶液。總酚含量以沒食子酸等價物表示，按照標準曲線線性方程y=0. 0917x+0.0208，R2=0.9996來測定總酚含量。其中：y為吸光度；x為樣品質量濃度（GAE，μg/mL）
DPPH自由基清除能力
  40μL樣品加入到4mL0.1mmol/LDPPH-甲醇溶液中，再加入450μL50mmol/LTris-HClbuffer（7.4），25°C溫度下恒溫水浴30min。以去離子水為參比溶液。在517nm波長處測定吸光度（%）=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100 （1）式中，A0———空白對照液的吸光度；A1———樣品測定管的吸光度；A2———樣品本底管的吸光度。
還原力測定
  30μL樣品加入到2.5mL 磷酸緩沖液（0.2mol/L，pH6.6），然后加入2.5mL 10g/L鐵qin化鉀，50°C反應30min，再加入0.1g/ mL三氯乙酸2.5mL，在3000r/min下再次用蜀科高速離心機離心10min，立即取2.5mL上清液，加入2.5mL去離子水和0.5mL1g/L三氯化鐵。以去離子水為參比溶 液，在700nm波長處測定吸光度。吸光度越高，還原力越強。
超氧自由基清除能力 
  50μL樣品加入到950μL磷酸緩沖液（0.1mol/LpH7.4），然后加入1mL120μmol/LPMS（用0.1mol/L的PBS，pH 7.4配制），1mL936μmol/LNADH（用0.1mol/L的PBS，pH7.4配制）和1mL300μmol/LNBT（用0.1mol/L的PBS，pH7.4配制）。在環境溫度下，反應5min。以去離子水為參比溶液。在560nm波長 處測定吸光度。 超氧自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/A0] ×100
羥基自由基清除能力
  135μL樣品加入 到1.4mL6mmol/LH2O2，然后加入0.6mL20 mmol/L水楊酸鈉和2mL1.5mmol/L硫酸亞鐵，37°C溫度下恒溫水浴1h。以去離子水為參比溶液。在562nm波長處測定吸光度。 羥基自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100
ABTS自由基清除能力
  用7mmol/LABTS（用5mmol/L的PBS，pH7.4配制），加入過 硫酸鉀使終濃度為2.45mmol/L，在室溫條件下黑暗放置12~16h。使用前把ABTS自由基用PBS稀釋成在734nm波長處吸光度為0.7±0.02。 取10μL樣品加入到5mL上述稀釋液中，在 30°C溫度下反應5min。以去離子水為參比溶液。在734nm波長處測定吸光度。 ABTS自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100
  經實驗研究表明，葡萄固有的多種有益菌天然發酵而產生的葡萄酵素產品具有良好的抗氧化性能。抗氧化性能變化規律研究表明：發酵過程中總酚含量、還原力、DPPH自由基清除能力、羥基自由基清除能力和ABTS自由基清除能力總體呈逐漸增加趨勢，超氧自由基清除能力呈現先增加后略微降低再增加的趨勢。因此，平時可以適當食用功能性微生物發酵產品，可以起到一定的抗衰老，抗菌，消炎，凈化血液，增強機體免疫能力等多種保健功能。
  此實驗中，蜀科立式高速離心機發揮了強大作用，相關領域客戶如果對實驗中的離心機感興趣可以隨時，給您更多詳細的解答哦！